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簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程

發(fā)布時間: 2020-11-18

葡萄球菌屬是革蘭氏陽性球菌,因鏡檢時呈單個、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群,如串狀葡萄,故稱為葡萄球菌。葡萄球菌無鞭毛,不能運動。無芽胞,需氧或兼性厭氧,對營養(yǎng)要求不高。


簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程


致病性的葡萄球菌多數(shù)能產(chǎn)生血漿凝固酶,而非致病性菌株一般不產(chǎn)生,因此,血漿凝固酶試驗是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標之一。


簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程


致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶:


一種是結合凝固酶,存在于菌體細胞壁上,可直接作用于血漿中纖維蛋白原,使其凝集成塊,并附著于細菌表面,玻片法和試管法均可; 另一種稱為游離凝固酶,是在菌體內(nèi)生成后分泌至菌體外,被血漿中協(xié)同因子激活,形成葡萄球菌凝固酶類物質(zhì),使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白,導致血漿凝固,適用于試管法。


為方便理解,請看下表:


簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程


玻片法血漿凝固酶試驗應用已久,醫(yī)院臨床實驗室多采用此方法,此方法優(yōu)點:快速、簡單、易于操作。缺點:出現(xiàn)假陽性,對血漿的濃度,敏感性,特異性要求較高。而試管法的優(yōu)點:結果穩(wěn)定,可檢測游離型凝固酶和結合型凝固酶。《GB 4789-2016食品安全國家標準?食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》中也采用了試管法。


簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程

簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程


血漿凝固酶試驗所需的試劑藥品與菌株


1、實驗藥品:凍干血漿(CM304)、BHI肉湯(GCM917B/CM917B)、營養(yǎng)瓊脂(GCM107/CM107)、無菌水。

2、血漿凝固酶對照菌株:陽性菌株:金黃色葡萄球菌 ??陰性菌株:表皮葡萄球菌。


簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程


血漿凝固酶試驗操作流程中的注意事項


1、 將在Baird-Parker平板上或血平板上的可疑菌落同時接種在5ml的BHI肉湯與營養(yǎng)瓊脂,36℃±1℃,培養(yǎng)18-24h。?


注意事項

培養(yǎng)完成后,先觀察BHI肉湯培養(yǎng)物的生長狀態(tài)。如果出現(xiàn)生長狀態(tài)不良,菌液濁度不夠,需要用營養(yǎng)瓊脂上的菌落重新接種BHI肉湯活化。


2、吸取0.5ml無菌水到CM304凍干血漿西林瓶中,搖勻使之溶解均勻,再加入上述新鮮BHI培養(yǎng)物0.2-0.3ml,混合均勻后放置36±1℃培養(yǎng)。?

注意事項

加入新鮮的BHI培養(yǎng)物,“新鮮”應理解為,培養(yǎng)物從培養(yǎng)箱取出后,立即進行試驗。以保證培養(yǎng)物的酶活力良好。避免出現(xiàn)因取出一段時間后,因酶活力降低而引起的假陰性;加入培養(yǎng)物后要輕輕轉動瓶身至混合均勻,不要采取劇烈搖晃的方式。


3、每間隔0.5h觀察一次結果,直至6h結束,若出現(xiàn)凝固(凝固體積大于原體積一半)即待測菌血漿凝固酶為陽性,否則為陰性 。

注意事項

試驗應每半小時觀察一次,不可直接觀察第6h后的結果。一些金葡菌能夠產(chǎn)生蛋白酶來分解纖維蛋白,而出現(xiàn)先凝集而后消融的情況,保證每半小時觀察一次,防止因觀察不及時,而誤判成假陰性。觀察凝固情況時,采用將西林瓶緩慢傾斜或倒置的方式。不要采用搖晃的方式進行觀察?。?!當凝固體積大于原體積一半,判為陽性。


簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程

結果判定常見情況分析


當遇到凝集現(xiàn)象不明顯,對結果的判定產(chǎn)生疑問時,可參照阿加西老師的《有關金葡菌不得不說的事》里提到的方法,進行操作。先對試管的凝集程度進行評分。再進行判定。3+以上者判為陽性,1+、2+者,可將培養(yǎng)物重新培養(yǎng)后,再做一次血漿凝固酶實驗?;虿捎闷渌椒▽梢删赀M行鑒定。


簡述血漿凝固酶試驗的原理與操作流程


參考文獻


1、 GB 4789.10-2016食品安全國家標準?食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗

2、 阿加西.有關金葡菌不得不說的事

3、 陳俊, 陳偉, 林新華, et al. 葡萄球菌血漿凝固酶試驗的探討[J]. 中華臨床醫(yī)藥雜志(北京), 2001, 22(3):7-8.

4、 許麗虹. 三種鑒定葡萄球菌凝固酶方法的比較[J]. 醫(yī)學信息, 2014, 000(006):193-194.

5、 Sperber W H,Tatini S R. Interpretation of the tube coagulase test for identification of Staphylococcus aureus.[J]. Applied microbiology,1975,29(4).



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