關(guān)于乳品中沙門氏菌檢測的那些事兒（上）

發(fā)布時間： 2018-09-05

近期愛爾蘭奶粉污染沙門氏菌的事件鬧的人心惶惶，雖然愛爾蘭政府后來發(fā)布公告表示未在任何愛爾蘭配方奶粉生產(chǎn)廠家發(fā)現(xiàn)沙門氏菌，但我們也不能忽視對沙門氏菌的檢驗，嬰幼兒的免疫系統(tǒng)較為脆弱，尤其是高度易感嬰兒，比如早產(chǎn)兒、低出生體重嬰兒、免疫缺陷嬰兒等，一旦喂食了被沙門氏菌污染的嬰幼兒配方乳粉，極易被感染致病，出現(xiàn)發(fā)燒、腹瀉等腸炎癥狀，嚴(yán)重的可能會引發(fā)敗血癥，甚至死亡。

下面讓我們溫習(xí)一下GB4789.4-2016沙門氏菌的檢驗過程及操作時的注意事項。

預(yù)增菌

樣品加入緩沖蛋白胨水（BPW）中進行預(yù)增菌，任何樣品均需進行預(yù)增菌。有盆友問啦，為什么要用BPW呢？那是因為啊，食品在加工過程中采用加熱、干燥等加工工藝使得細(xì)胞存在不同程度的受損，而緩沖蛋白胨水（BPW）呢，作為非選擇性的增菌培養(yǎng)基，較高pH的緩沖體系可以幫助受損的細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定、活力滿滿的生理狀態(tài)，此處也可使用即用型的BPW，因為它操作方便，節(jié)省時間。

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選擇性增菌

這里要注意啦，增菌接種前一定要把預(yù)增菌后的BPW樣品溶液輕輕搖動混勻，這樣做的原因是有些沙門君是懶得動的（因為有些沙門氏菌沒鞭毛），它們會潛伏在溶液底層，所以我們要把增菌液“搖擺、搖擺”，讓不動的沙門君們在增菌液中都漂浮起來，吸出，分別接入TTB和SC培養(yǎng)基中。

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此步驟防止漏檢的方式是采用兩種不同的選擇性增菌液（TTB和SC）進行增菌，是因為沙門君的家族太龐大了，血清型都有2000多種，所以得加強引誘措施，采用不同的培養(yǎng)溫度和不同抑制性的培養(yǎng)基來給不同的沙門君提供安逸的環(huán)境來繁衍后代，同時盡量阻攔革蘭氏陽性菌和其他大多數(shù)的腸道菌來搗亂，有些細(xì)菌還是會趁虛而入的。

下面咱們來說一下TTB和SC使用過程中的注意事項：

TTB培養(yǎng)基：待基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至50℃以下時，加入煌綠和碘液，因為培養(yǎng)基中含有不溶解的CaCO₃（用來中和吸收有毒性的代謝物質(zhì)），會有大量的白色沉淀，在分裝時應(yīng)邊搖勻邊分裝，接種后培養(yǎng)條件為：42℃±1℃培養(yǎng)18h-24h；

SC培養(yǎng)基：千萬不可高壓滅菌，不可過度加熱，最好是現(xiàn)用現(xiàn)配。發(fā)現(xiàn)干粉或溶液變紅就不要使用了。培養(yǎng)基開封后建議用封口膜密封后冷藏保存，可延緩培養(yǎng)基變質(zhì)，接種后培養(yǎng)條件為：36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h；

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增菌后的TTB與SC

分離

TTB與SC增菌液在接種選擇性分離培養(yǎng)基前，均應(yīng)輕輕搖動混勻，原因同選擇性增菌一樣，也是為了防止不運動的沙門氏菌漏檢；混勻后，用直徑為3mm的接種環(huán)（也就是實驗室用的10μL接種環(huán)）將TTB與SC增菌液“分別”劃線接種于兩種選擇性平板，一種是BS瓊脂，為必選的選擇性分離培養(yǎng)基，另外一種選擇性分離培養(yǎng)基是從XLD瓊脂、HE瓊脂、沙門顯色培養(yǎng)基中選擇一個即可；沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征參考下圖：

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注意：在一種選擇性瓊脂培養(yǎng)基上不同沙門氏菌會長出不同的菌落形態(tài)，在做樣品檢驗時要參考上圖中沙門氏菌的菌落特征，將典型菌落及可疑菌落純化后做生化和血清鑒定，避免漏檢，例如：在XLD瓊脂接菌培養(yǎng)18h-24h時，鼠傷寒沙門氏菌為粉紅色菌落，呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，大腸埃希氏菌為黃色菌落，豬霍亂沙門氏菌為淡黃色菌落，比大腸埃希氏菌的顏色略淺，易混淆，為防止漏檢，XLD瓊脂平板上黃色菌落也應(yīng)做生化和血清鑒定，不可忽視。

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