空腸彎曲菌（Campylobacter jejuni）是一種可以引起人類急性腸炎和食物中毒的人畜共患病原菌。該菌培養(yǎng)條件苛刻，生長需要特定的環(huán)境，菌株不易保存。通常在微需氧（5%氧氣、85%氮氣、10%二氧化碳）、42±1℃環(huán)境下，可存活4～5d，最后因培養(yǎng)基表面干燥而導(dǎo)致菌體干燥死亡。
一、空腸彎曲菌的活化方法
1.配制彎曲菌活化肉湯
a. 將各成分溶于蒸餾水中，經(jīng)過0.22μm濾膜過濾除菌。FBP 根據(jù)需要量現(xiàn)用現(xiàn)配，在-70℃儲存不超過3個月或-20℃儲存不超過1個月。
b. 裂解脫纖維羊血提前從-70℃冰箱取出恢復(fù)至室溫。
c. 稱取CM125布氏肉湯并溶解滅菌，滅菌后冷卻至室溫。每100ml基礎(chǔ)加入5ml裂解脫纖維羊血和0.5ml FBP溶液，分裝試管，即制備完成。
2.肉湯培養(yǎng)
從-70℃冰箱取出彎曲菌凍存甘油管，傾倒至彎曲菌活化肉湯中。置于厭氧培養(yǎng)罐中，加入微需氧產(chǎn)氣袋于42℃培養(yǎng)24h。
3.平板培養(yǎng)
取10ul肉湯培養(yǎng)物劃線至哥倫比亞血平板（PB003A），42℃微需氧培養(yǎng)44±4h，觀察菌落形態(tài)。典型菌落為灰色、扁平、濕潤有光澤，呈沿接種線向外擴(kuò)散的傾向。
4、菌株驗證
通過菌落形態(tài)和生化實驗對菌株進(jìn)行驗證，確認(rèn)后進(jìn)行菌株保藏。
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二、空腸彎曲菌的保藏方法
1.雙倍布氏肉湯甘油保存管制作：稱取5.62g CM125布氏肉湯干粉，溶于70ml蒸餾水、30ml甘油中，滅菌后冷卻至室溫，加入5ml裂解脫纖維羊血、0.5ml FBP溶液，混勻后分裝到凍存管中，每管1ml。
2.?使用接種環(huán)刮取哥倫比亞血平板上的純菌落（盡可能多）至凍存管中，渦旋震蕩5s，于-70℃長期保存。
三、注意事項
不建議使用磁珠管保藏彎曲菌，存活率不如甘油凍存管。
-20℃保存的效果不如-70℃冰箱，如果使用-20℃保存，應(yīng)半年進(jìn)行一次傳代。
如果短期保存，可將厭氧罐同試管/平板放入2-8℃冰箱，一星期內(nèi)使用。
MSS樣本管理系統(tǒng)掃碼裝置及專用凍存管
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參考文獻(xiàn)：
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